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內(nèi)容摘要
(1) 角化細胞 (Keratinocytes) 在治療多種皮膚、口腔和耳部疾病方面具有潛力。
(2) 成年角化細胞的體外培養(yǎng)和擴增容易，適合自體和同種異體細胞治療產(chǎn)品。
(3) 之前限制：成年角化細胞缺乏高效的轉(zhuǎn)染方法。
(4) 本研究目標：開發(fā)符合GMP標準的、可擴展的細胞工程流程，使用MaxCyte®電穿孔技術轉(zhuǎn)染來自四個不同解剖位置的新生兒和成年原代角化細胞。
實驗流程
• 從全皮樣、鼓膜、扁桃體、前臂等部位提取純凈的原代角化細胞。
• 胞培養(yǎng)、擴增、冷凍保存、基因工程、驗證，最終形成細胞治療產(chǎn)品。
主要發(fā)現(xiàn)
• 使用MaxCyte技術，高效地將mRNA或CRISPR-Cas9核糖核蛋白 (RNPs) 傳遞給原代角化細胞，不損害細胞活性、形態(tài)或生長能力。
上圖：使用MaxCyte ATx電轉(zhuǎn)儀對原代包皮角化細胞進行mRNA-GFP或ATTO550標記的CRISPR RNPs電穿孔后的流式細胞儀分析結(jié)果，顯示了高效的轉(zhuǎn)染效率。
上圖：使用CCR5靶向CRISPR RNP電穿孔后的原代角化細胞的生長曲線，電轉(zhuǎn)后細胞增殖幾乎不受影響。
上圖：使用MaxCyte ATx儀器對來自不同解剖位置的原代皮膚成纖維細胞、扁桃體來源的口腔角化細胞和鼓膜 (中耳) 角化細胞進行ATTO 550標記的CRISPR RNPs電穿孔后的流式細胞儀分析結(jié)果，顯示了高效的轉(zhuǎn)染效率。
• 單次電穿孔可實現(xiàn)高效的多重基因編輯，簡化了流程。
上圖：分別電穿孔1種、2種、6種CRISPR RNPs后96小時，使用Synthego®多向?qū)Щ蚯贸噭┖羞M行的流式細胞儀分析。
• 提高了轉(zhuǎn)染效率和細胞活性，減少了角化細胞工程時間，提高了成功率。
• 展示了MaxCyte電穿孔過程的可擴展性，可工程化數(shù)百萬原代角化細胞，不損失效果。
MaxCyte電穿孔技術使原代角化細胞基因組工程更快，風險更低。
全文結(jié)論
(1) MaxCyte ATx®平臺提供了一種高效、符合GMP標準的多重轉(zhuǎn)染方法，用于開發(fā)和生產(chǎn)工程化角化細胞治療產(chǎn)品。
(2) 電穿孔技術保持了原代新生兒和成年角化細胞的高活性、正常形態(tài)和低氧化應激。
(3) 該技術允許多達6個CRISPR RNPs的傳遞，經(jīng)過多輪轉(zhuǎn)染，效率不降低。
(4) 平臺的靈活性允許快速開發(fā)特定亞群的角化細胞和成纖維細胞的自體和同種異體細胞治療流程。
(* 本文轉(zhuǎn)載自「拓普百奧」微信公眾號，作者：宇文數(shù)學，已獲得作者授權)
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